カラシナアブラムシの収集、維持、および分子同定

まず、アブラナ科の葉を切除し、底に水を浸透させた濾紙を入れた一時的なメンテナンスペトリ皿を準備します。次に、準備したペトリ皿にアブラムシを5匹置きます。アブラムシの数が増えたら、最初に切り取った葉を4〜6個に切ります。

アブラムシの入った小さな葉片を、新鮮な葉と湿った濾紙が入った別々のペトリ皿に移します。アブラムシのゲノムDNAを採取するには、まずペレット乳棒を使用してアブラムシをホモジナイズします。次に、メーカーのガイドラインに従って、Gene-Spin ゲノム DNA 分離キットを使用して DNA を抽出します。

50マイクロリットルの予熱したヌクレアーゼフリー水でゲノムDNAを溶出して、抽出プロセスを終了します。プライマーペアを含むPCRマスターミックスにDNAサンプルを添加することにより、PCR増幅およびDNAシーケンシングを行います。1%アガロースゲル電気泳動を用いてPCR産物を分析し、マスタードアブラムシの同一性を確認します。

野外で採取したアブラムシは、PCRアンプリコンサイズやLipaphis erysimi CO1シーケンシングなどの分子マーカーを用いて、カラシナアブラムシであることが確認されました。