真菌ライブラリーからのEPF回収のために、真菌分離株を4分の1強度のSDAプレートに塗抹することから始めます。分生子を収穫する前に、摂氏25度の暗闇で10〜14日間孵化させます。これに続いて、2〜3 mLの0.03%Tween 80を培養プレートにピペットで移します。
次に、接種ループを使用して分生子をこすり落とします。次に、真菌懸濁液を遠心分離管に移します。懸濁液を最高速度で激しく渦巻きさせ、サンプルを血球計算盤にピペットで移し、分生子の数を数えます。
懸濁液内の分生子を0.03%Tween 80を使用して、所望の濃度が得られるまで希釈します。接種室を準備するには、まず直径9センチメートルの葉の円盤を、底のシャーレを型として、またはハサミで切断します。次に、電子レンジを使用して各皿に1.5%の水寒天を準備します。
30 mLの冷却水寒天をペトリ皿に注ぎ、層流フードで固化させます。寒天の表面が半固体になったら、葉の円盤をその不軸面を上に向けて置き、少し押して寒天に埋め込みます。次に、葉の円盤に20匹のアプテラスアダルトを置きます。
接種チャンバーのカバーを開けて、0.3 mLの分生子懸濁液をアブラムシと葉のディスクに直接スプレーします。懸濁液が乾いたら、マスタードアブラムシの溺死を防ぐためにカバーを閉じます。続いて、パラフィンフィルムで接種室を密閉し、湿度を高く保ちます。
チャンバーを摂氏25度に設定し、明暗日長をそれぞれ12時間とするインキュベーターに入れます。実体顕微鏡を使用して、12時間ごとに5日間死亡率をカウントします。病原性スクリーニングにより、マスタードアブラムシの生存率は一貫しており、対照群は85%の生存率を示しました。
冬虫夏草はアブラムシを殺す能力が最も速く、接種後3日と4.5日で50%と90%の道徳性(DPI)を示しました。ボーベリア株141、143、および153は、3DPIでわずか5%の死亡率で、ゆっくりとしたアブラムシ殺傷能力を示しました。プルプレオシリウムを除いて、ほとんどのEPF分離株は、70DPI以内で5%を超える補正死亡率を示しました。
Beauveria bassianaは、EPF分離株の中で最も高い死亡率100%を示しました。EPF真菌症は、病原性スクリーニング中に、Metarhizium種、Beauveria種、Purpureocillium lilacinum、およびCordyceps cateniannulataに感染したマスタードアブラムシの死体で観察されました。
