アシネトバクター 共焦点レーザー走査型顕微鏡(CLSM)によるバイオフィルムの可視化

まず、顕微鏡分析用に調製した滅菌済み96ウェルプレートの各ウェルに200マイクロリットルの細菌接種物を添加します。プレートを摂氏25度で24時間インキュベートしてから、ピペットで上清を取り除きます。次に、300マイクロリットルのろ過滅菌脱イオン水を各ウェルに慎重に加えます。

もう一度ピペットで上清を取り除きます。別のチューブで、SYTO 9とヨウ化プロピジウムの希釈混合物と、ろ過滅菌した脱イオン水をそれぞれの所望の最終濃度に調製します。次に、200マイクロリットルの混合物を各ウェルに加え、暗所で室温でプレートを20〜30分間インキュベートします。

共焦点レーザー走査型顕微鏡では、バイオフィルムの形成が菌株によって大きく異なることが明らかになりました。アシネトバクター・ジュニアイ、アシネトバクター・バウマニ、アシネトバクター・ウルシンギには、バイオフィルムの形態が異なるかなりの量のバイオフィルムが見つかりました。