Surgical Protocol for the Selective Photoconversion of Lung Metastases

マウスを手術の準備をした後、胸骨の左側7ミリメートル、肋骨下縁の約7ミリメートル上の標的領域を特定します。鉗子を使用して特定された領域に皮膚を持ち上げ、鋭利なマイクロ解剖ハサミを使用して10ミリメートルの円形切開を行い、皮膚のみを切断します。次に、胸郭の軟部組織を取り除き、焼灼ペンを使用して両端の主要な血管を焼灼します。

鉗子で6番目または7番目の肋骨を持ち上げ、鈍いマイクロ解剖ハサミの1枚刃を使用して肋間筋を突き刺します。次に、ハサミを静かに回転させ、肺組織と肋骨との接触を避けながら、肋間腔を約10ミリメートル切開します。手首または手で圧縮空気を繊細に放出して、適切な流動強度を決定し、ノズルから破片を取り除きます。

次に、肺の損傷を引き起こさないように、切開部に短時間の空気を吹き込みます。鉗子で、6番目または7番目の肋骨を持ち上げ、胸壁に平行なブレードでリトラクターを肋間切開に挿入します。次に、ハンドルを慎重に離して、リトラクターを開き、肺を徐々に露出させます。

次に、37度に温めた滅菌PBSを2〜3滴、露出した肺組織に塗布して、乾燥を防ぎます。小さな切り欠きのあるアルミホイルをマウスの上に重ね、露出した肺組織の上に直接配置します。切り欠きには、標的を絞った肺の写真変換のために、開いた胸部と近くの組織のみが表示されていることを確認します。

次に、マウスとアルミホイルの上に切り欠きのある箱を配置し、切り欠きが露出した肺に揃うようにします。そして、箱の切り欠きの真上に写真変換ランプをセットします。次に、光変換ランプを作動させて、露出した肺組織を6分間連続して照らします。

写真変換後、ランプを無効にし、ランプボックスとアルミホイルマスクをマウスから取り除きます。手首で空気を排出して肺を胸壁から分離し、胸部切開部で空気を排出します。リトラクターハンドルをしっかりとつかみ、握ってブレードを閉じます。

閉じたリトラクターを肋間腔から慎重に操作し、肺組織に接触しないようにします。次に、5-0シルク縫合糸を使用して、単純な連続縫合パターンで肋間切開部を閉じ、切開部の両側の肋骨が組み込まれるようにします。縫合糸をしっかりと引っ張って、創傷の端が揃うようにし、胸壁の完全性を再確立します。

端を4回結んで縫合糸を固定します。縫合糸の尾部をできるだけ結び目に近づけてトリミングし、外科用ステープルを使用して皮膚を閉じます。胸腔から余分な空気を取り除くには、剣状突起の下に28ゲージの針が付いた1ミリリットルの注射器を挿入します。

シリンジを約1ミリリットルに戻します。.マウスからシリンジを取り外し、空気を排出します。青色光曝露前に肺転移を発現するDendra2の画像を示す。

肺転移を発現するDendra2を青色光に曝露したところ、6分間の曝露により、ex vivoサンプルとin vivoサンプルの両方で、光変換されたチャネルで最も明るいシグナルが生成されることが示されました。青色光曝露で手術を受けたマウスの3つの組織タイプすべてにおいて、光変換細胞および非光変換細胞が同定された。青色光に曝露せずに手術を受けたマウスの組織には、非光変換された腫瘍細胞のみが見つかりました。