ショウジョウバエ 微小管可視化のための幼虫の解剖と固定

徘徊するショウジョウバエの3番目の幼虫を長い鈍い鉗子を使って選ぶことから始めます。幼虫を血リンパ様生理食塩水で洗い、ワイプで乾かします。次に、実体顕微鏡の下の解剖皿に幼虫を背側または腹側に配置します。

観察する組織に応じて、背側または腹側の解剖を選択します。幼虫の口のフックと尾を固定して、長い位置を維持します。次に、幼虫が乾燥するのを防ぐために、血リンパ様の生理食塩水を一滴加えます。

解剖ハサミを使用して、完全に切断せずに後端に近い小さな横切開を行います。腹側正中線に沿って切断し、前端に向かって移動します。次に、4つの昆虫ピンをそれぞれ幼虫の角に挿入します。

幼虫の伸びを最大化するために、昆虫ピンに必要な調整を行います。鉗子を使用して、筋肉への害を避けながら内臓を優しく切除します。幼虫を固定するには、死骸を解剖皿に貼り付けたまま、100Lの4%パラホルムアルデヒドに浸します。

この後、ピンを取り外します。次に、0.2%PBSTで満たされた2 mLの微量遠心チューブにサンプルを移します。チューブをシェーカーの上に15RPMで10分間置きます。