Mouse Liver Operation and Perfusion for Studying Hepatic Metabolism

まず、麻酔をかけたC57 Black/6 JRjマウスを置きます。加熱された手術台の上で仰臥位。つま先をつまむことに対する反射反応がないことを確認します。

マウスに70%エタノールをスプレーして、髪の毛がハサミにくっつかないようにします。ハサミを使用して、腹部の基部を切開し、胸郭の両側を上向きに切り込み、腹腔を露出させます。綿棒を使用して腸を右に動かし、門脈を露出させます。

湾曲した鉗子を使用して、門脈の下に2つの結紮糸を配置し、各結紮糸をゆるく結びます。次に、0.7ミリのカテーテルを門脈に挿入します。穿孔したら、針をカテーテルから外し、カテーテルの先端が肝臓に近づくまでカテーテルを静脈に導きます。

次に、合字を締めます。肝臓を観察します。ローラーポンプからの流量を設定し、プロフュージョンチューブを取り付けます。

摂氏37度で肝臓の大量投与を開始します。肝臓が青白くなったら、ハサミを使って胸郭と横隔膜を切ります。次に、細かい点鉗子を使用して、肝上下大静脈の下に結紮糸を配置します。

次に、心臓の右心房から肝上下大静脈にカテーテルを挿入します。穿孔したら、針を取り外し、カテーテルを静脈から肝臓に近づけます。次に、結紮糸を締めます。

灌流排水を回収するためのチューブを取り付け、すべてのチューブを防水テープで固定します。血管クランプアダプターを使用して、右腎静脈のすぐ上の肝下大静脈を横切って血管クランプを配置し、死んだ混合物を防ぎます。次に、灌流流量を毎分3.5ミリリットルに増やします。

タイマーと圧力の記録を開始します。生理食塩水で湿らせた滅菌ドレープで肝臓を覆い、30分間平衡化し、廃液の量を測定します。30分間の平衡化後、フラクションコレクターで最初のベースラインサンプル採取の実験を開始します。

気泡トラップを定期的に監視し、空に近づいたら灌流バッファーを補充します。緩衝サンプルは、臓器に入る直前に三方活栓を介して、下大静脈に挿入された収集カテーテルから採取します。血液ガス分析装置を使用して、採取したサンプルを測定し、臓器が代謝的に活発であることを確認します。

シリンジポンプを使用してベースライン灌流の15分後、所望の流量で三方活栓を通して試験物質を注入することにより、最初の刺激を開始します。シミュレーション後、20〜30分間ベースラインサンプルを収集してから、2回目の刺激を開始します。2つの刺激期間のそれぞれに先行する安定したベースライン期間を持つ灌流肝臓での尿素の産生は、混合アミノ酸による2つの連続した刺激に対する尿素の反応が一貫していることを示唆しています。.

グルコースと非エステル化脂肪酸の安定した基礎放出が観察されました。.グルカゴン注入中のグルコースおよび非ED脂肪酸の大幅な増加前。基礎状態およびグルカゴン注入中の平均値は、グルカゴンが肝臓のグリコーゲン分解と脂肪分解を急速に刺激することを示唆しています。.

しかし、基底期が一定でないと、尿素応答を次の尿素応答と区別することは不可能になります。