Isolation of Single-Fiber from Freeze-Dried Human Skeletal Muscle

まず、凍結乾燥した筋肉サンプルを実体顕微鏡の下に置き、低倍率で観察します。1対の微細組織解剖鉗子を使用して、筋肉を所定の位置に保持し、繊維の小さな束を他の鉗子で分離します。繊維の1つの束を分離し、束から単一の繊維セグメントが抽出されるまで、それらを静かに引き離します。

次に、繊維をペトリ皿の透明な領域に移します。各単一ファイバーセグメントを50倍の倍率で調査します。ファイバーの一端をさらに分離してみます。

繊維が壊れ始めたら、それは単一の繊維です。一対の鉗子で繊維を慎重に収集し、事前に調製した変性緩衝液のアリコートに入れます。ベンチのチューブをしっかりと3回叩きます。

その後、ファイバーサンプルをボルテックスし、2, 500Gで5秒間短時間遠心分離して、サンプルがチューブの底に落ち着くようにします。サンプルを室温で1時間休ませてから、将来の使用のために摂氏マイナス80度で保管します。