In Vivo Matrix Gel Plug Assay のための血管細胞を用いたマトリックスゲルの調製(英語)

まず、M199粉末を90ミリリットルの脱イオン水に10倍の濃度に溶解し、続いて10ミリリットルのFBSを添加して、10倍のM199培地を調製します。0.22ミクロンのフィルターで溶液をろ過します。濾過した培地は、摂氏4度で最大2ヶ月間保存できます。

維管束細胞でマトリックスゲルを調製するには、約200万個の維管束細胞を使用します。適切に調製した細胞ペレットを含む滅菌1.5ミリリットルチューブを氷浴で冷却します。マトリックスゲルを氷浴で完全に溶解し、混合やボルテックスを行わずに溶解します。

同様に、調製したM199培地を、目的の試験試薬または薬剤と一緒に10回摂氏4度に冷却します。次に、体積比を8.8対1〜0.2に維持し、予冷したマトリックスゲルと、10%FBSを含む予冷した10倍M199培地、および予冷した試験試薬を組み合わせて、マトリックスゲル混合物を製造します。最後に、予冷した細胞を調製したマトリックスゲル混合物400マイクロリットルに、気泡が形成されないように穏やかに混合して再懸濁します。

マウスがマトリックスゲル注入の準備が整うまで、マトリックスゲル中の細胞を含むチューブを氷上に保管してください。