マウスからのデキストラン-FITC注入およびマトリックスゲルプラグ採取によるマトリックスゲルプラグアッセイ

マウスにデキストランを注射するには、マトリックスゲル注射の7日後にFITCで、0.5ミリグラムのデキストラン、FITCを500マイクロリットルの二重蒸留水に再懸濁します。それを完全にボルテックスして、1マイクロリットルあたり1マイクログラムのデキストラン、FITC溶液を得る。29ゲージのシリンジに50マイクロリットルのデキストランFITC溶液を充填します。

マウスを尾静脈注射器具に固定し、75%アルコールに浸した綿球で尾部を消毒してから、シリンジに50マイクロリットルのデキストランFITC溶液を尾静脈に慎重に注入します。.綿棒で注射部位に1分間圧力をかけ、出血を止めます。マウスをケージに戻し、30分間リラックスさせてから、マトリックスゲルプラグを回収します。

ゲルプラグを回収するには、手術用ハサミを使用して、プラグのマークされた境界に沿って安楽死させたマウスの皮膚を切断します。そして、マトリックスジェルプラグの上の皮膚を取り除きます。プラグを回収し、リン酸緩衝生理食塩水を入れたビーカーですすぎ、余分な血液を洗い流します。

次に、組織包埋カセットの底部を約0.5ミリリットルの組織包埋ゲルで覆います。次に、マトリックスゲルプラグを組織包埋ゲルに計画した向きで迅速に配置します。追加の組織包埋ゲルでプラグを埋め込みます。

カセットを摂氏マイナス80度で12時間固化させます。固化したプラグブロックを取り外した後、凍結ミクロトームを使用して12ミクロンの厚さの切片を切断します。次に、切片を顕微鏡スライドに取り付けます。