まず、桿体光受容体特異的プロモーターの下でGFPおよびニトロレダクターゼ(NTR)を発現するトランスジェニック株を使用します。NTRは、プロドラッグメトロニダゾール(MTZ)を細胞毒性剤に変換し、NTR発現桿体を選択的にアブレーションします。GFPモニタリングでは、スプーンを使って麻酔をかけたオタマジャクシをそっとキャッチし、小さなペトリ皿内の湿った組織に慎重に置きます。
GFP蛍光を蛍光実体顕微鏡で観察し、眼の写真画像を撮影します。オタマジャクシの入ったペトリ皿を、完全に目覚めるまで飼育水を入れた大きなタンクに慎重に浸します。網膜変性症を個別にモニタリングするには、各オタマジャクシを30ミリリットルの10ミリモルMTZ、または対照溶液中のトランスジェニック兄弟を含む小さな容器に入れます。
バッチ処理の場合は、トランスジェニックオタマジャクシを1リットルのMTZ(対照溶液)を入れた大きな容器に入れます。オタマジャクシを暗闇で摂氏20度で1週間飼育し、MTZの劣化を防ぎます。7日後、蛍光実体顕微鏡でGFPを観察し、眼の写真画像を撮影します。
蛍光強度の低下、または蛍光の事実上の不在でさえ、桿体の劣化を示します。MTZで治療したトランスジェニックオタマジャクシの眼は、対照と比較してGFP蛍光の減少を示し、GFP免疫染色によって網膜切片でさらに確認されました。
