器官形成研究のための鶏皮外植片培養

まず、受精した鶏の卵を摂氏38度の加湿インキュベーターでインキュベートします。次に、ステージ28〜32の鶏の胚をHBSSで満たされた60ミリメートルのシャーレに入れます。背側胚の皮膚と頭部を解剖した後、手足のつぼみをそっと引っ張って、体の腹側を下向きに再配置します。

次に、胚体の両側に沿って、前方から後方に切開します。一対の鉗子で手足のつぼみを縦方向につかみ、体を安定させます。時計職人の鉗子を使って、首から尾の部分まで丁寧に皮膚をはがします。

鋭利なハサミを使って、剥がした皮膚にまだ付着している皮下組織を繊細に取り除き、皮膚のエッジを滑らかにします。次に、2ミリリットルのサプリメントDMEMを6ウェルディッシュの各ウェルに加えます。ウェルに抗生物質を添加した後、ウェル内に滅菌組織培養インサートを配置し、培地が培養インサートの外側を囲むようにします。

次に、HBSSに浸した状態で皮膚をヘラに移し、しわや折り目を防ぎます。完了したら、切除した皮膚をHBSSを含む皿に移します。ヘラから皮膚を折りたたむことなくゆっくりと培養インサートにスライドさせます。

200マイクロリットルのピペットを使用して、インサートから余分なHBSSを取り除きます。最後に、皮膚外植片培養物を摂氏37度でインキュベートし、5%の二酸化炭素と95%の空気をブレンドします。2日ごとにミディアムを交換してください。

羽の原基は、培養で2日後に短い羽芽に発達しました。そして長い羽芽は培養で4日後に発達しました。真皮のプラコードは、側面よりも正中線でより成熟していました。