マルチオームシーケンシングのためのヒト膵臓腫瘍細胞からの核分離

まず、以前に融解した膵臓腫瘍細胞懸濁液を2ミリリットルの微量遠心チューブに移し、PBSを添加して最終容量が2ミリリットルになるようにします。次に、血球計算盤を使用して、細胞の量と質を評価します。遠心分離によって細胞ペレットが得られたら、徐々に小さくなるピペットチップを使用して、上清を慎重にデカントして、ペレットの分布を最小限に抑え、デカントされた液体を最大化します。

1X細胞溶解バッファーを調製し、次に100マイクロリットルを事前に調製した900マイクロリットルの細胞溶解希釈バッファーに添加して、0.1X細胞溶解バッファーを得ます。100マイクロリットルの冷やした0.1X細胞溶解バッファーを細胞ペレットに移し、ピペットで5回静かにピペットに移し、完全に再懸濁します。氷上で3分間インキュベートした後、再懸濁したペレットに1ミリリットルの冷やした洗浄バッファーを加え、5回静かにピペットで移動させます。

遠心分離後、上清を図のように廃棄し、この洗浄プロセスをさらに2回繰り返します。トリパンブルー染色懸濁液を血球計算盤にロードし、核の数をカウントします。目標をターゲットとした核回収率に基づいて、核ペレットを1X核バッファーに再懸濁します。

再懸濁した核を40マイクロメートルのピペットチップセルストレーナーに慎重に通し、氷上で維持します。次に、原子核を数え直します。この方法で得られた原子核は、適切な大きさと形状を示した。

時折、核膜の軽度の点描が観察される可能性があり、血球計算盤による最終的な核評価で監視する必要があります。.