まず、ガットオンチップデバイスを摂氏60度に設定したドライオーブンに30分間入れて水分を取り除きます。次に、UVオゾン発生器を使用して、デバイスをUVおよびオゾン処理に60分間さらします。バインダークリップを使用して、上部マイクロチャネルの入口、バイパス、および出口チューブを固定します。
下部マイクロチャネルのインレットチューブを植えてから、下部マイクロチャネルのアウトレットチューブを外します。下部マイクロチャネルのバイパスチューブが開いたままであることを確認します。P100マイクロピペットを使用して、下部マイクロチャンネルの出口穴から100マイクロリットルの1%ポリエチレンイミン溶液を加えます。
下部マイクロチャンネルのアウトレットチューブを再接続します。下部マイクロチャネルのインレットバイパスチューブとアウトレットチューブを固定し、続いてバインダークリップを使用して上部マイクロチャネルのインレットチューブを固定します。次に、上部マイクロチャネルのアウトレットチューブを外し、バイパスチューブを開いたままにします。
次に、100マイクロリットルの1%ポリエチレンイミン溶液を上部マイクロ流路の出口穴から添加します。上部マイクロチャンネルのアウトレットチューブを再度取り付け、デバイスを室温で10分間インキュベートします。0.1%グルタルアルデヒドで手順を繰り返し、次に脱イオン水で余分な表面活性化溶液を取り除きます。
チップをオーブンで摂氏60度で一晩乾燥させます。翌日、チップをオーブンから取り出し、バイオセーフティキャビネットで10分間冷まします。バインダークリップを使用して、下部マイクロチャネルの入口チューブを含む、上部マイクロチャネルの入口、バイパス、および出口チューブを固定します。
下部マイクロチャンネルのアウトレットチューブを外します。20マイクロリットルの細胞外マトリックス(ECM混合物)を、下部マイクロチャネルの出口穴から添加します。次に、下部マイクロチャネルのアウトレットチューブを再度取り付けます。
上部マイクロチャネルの入口チューブを含む、下部マイクロチャネルの入口、バイパス、および出口チューブをバインダークリップで固定します。上部マイクロチャネルのアウトレットチューブを外した後、上部マイクロチャネルの出口穴から20マイクロリットルのVCM混合物を追加します。上部マイクロチャネルのアウトレットチューブを再度取り付けてから、下部チャネルのアウトレットチューブからバインダークリップを取り外し、両方のアウトレットチューブが開いていることを確認します。
チップを摂氏37度5%の二酸化炭素インキュベーターに1時間入れます。
