Cloning of Solute Carriers (SLCs) into pHTBV1.1 Bacmid for High-Throughput Protein Expression

まず、150ナノグラムの溶質担体(SLCクローン)と100ナノグラムのベクターを96ウェルプレートに添加します。10ミリモルのトリス溶液pH8で反応量を8マイクロリットルにします。次に、2マイクロリットルの組換え酵素ミックスを加え、室温で1時間インキュベートします。

インキュベーション後、1マイクロリットルのプロテイナーゼKを加え、摂氏37度で30分間インキュベートします。化学的に有能な大腸菌マッハ1細胞50マイクロリットルに4マイクロリットルの反応混合物を加え、ヒートショック法を用いて細胞を形質転換する。形質転換後、細菌懸濁液をLB寒天プレートにプレーティングします。

コロニーPCR用の適切なプライマーと標準プロトコルを使用して、SLC遺伝子インサートでpHTBV1.1ベクターを有するコロニーを同定します。