Reviving the Cryopreserved Day 32 hESC-Derived Photoreceptor Progenitors

まず、PRDMを摂氏37度に設定したウォーターバスに入れます。32日目のヒトES細胞由来の光受容体前駆細胞を含むクライオバイアルを液体窒素から除去し、ドライアイス上に保管します。次に、クライオバイアルを摂氏37度のウォーターバスで3〜5分間解凍します。

細胞を1ミリリットルのPRDMに再懸濁します。130Gで4分間遠心分離します 上清を除去した後、ペレットを1ミリリットルのPRDMに再懸濁します。細胞を数えるには、10マイクロリットルの細胞懸濁液を採取し、メーカーの指示に従って0.2%トリパンブルーと混合します。

細胞混合物を細胞計数チャンバースライドにピペットで移し、自動セルカウンターを使用して細胞数と生存率を測定します。細胞生存率が70%を超える場合は、残りの細胞懸濁液を130Gで4分間遠心分離します。上清を除去し、細胞ペレットをPRDMに再懸濁して移植します。

10マイクロリットルのピペットチップを使用して、細胞の凝集液をマイクロチューブに再懸濁し、凝集液が見えなくなるまで加熱します。懸濁液を33ゲージの注射シリンジにロードし、針を通して細胞溶液が押し出されることを確認します。