Mouse Splenic Single-Cell Suspension Generation and FACS Staining for Flow Cytometry-Based Sorting

まず、50ミリリットルの遠心分離管の上に70ミクロンのセルストレーナーを置き、PBSで濡らします。マウスから脾臓を単離した後、単一細胞懸濁液を生成するには、シリンジプランジャーのサムレストと30ミリリットルの冷たいPBSを使用して、脾臓をメッシュに通します。ろ液を300gで5分間遠心分離し、上清を除去します。

ペレットを1ミリリットルのアンモニウム-塩化物-カリウム溶解緩衝液に再懸濁し、室温で2分間インキュベートします。溶解後、50ミリリットルの冷たいPBSをチューブに加え、遠心分離機で上清を捨ててから、新たに調製した抗体カクテルにペレットを再懸濁します。細胞懸濁液を5ミリリットルのFACSチューブに移し、暗所で摂氏4度で30分間インキュベートします。

インキュベーション後、3ミリリットルの冷PBSをチューブに加え、遠心分離して上清を廃棄してから、ペレットを1ミリリットルの冷FACS再懸濁バッファーに再懸濁します。フィルターキャップFACSチューブを通して細胞をろ過します。