Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

まず、ヘマトキシリンとエオシンで染色したラットの鼻粘膜組織切片を顕微鏡ステージに置きます。画像がはっきりと見えるまで顕微鏡の焦点を調整します。組織画像を40倍でキャプチャします。

クエン酸リン酸緩衝液を沸騰するまで加熱します。次に、火から下ろした後、スライドを容器に加えます。沸騰するまで8分間加熱した後、8分間火を止め、その後、中火に切り替えて7分間弱火にします。

容器を自然に冷ました後、スライスをPBSに移します。脱色シェーカーを使用して、スライスを5分間振とうします。次に、免疫組織化化学ペンで乾燥組織の周りに円を描きます。

インキュベートする前に、スライスに3%過酸化水素溶液を加えます。次に、スライスをPBSに移して、前と同じように洗浄します。ブロックするには、マークされた円内に5%のヤギ血清を塗布します。.

インキュベーション後、ブロッキング溶液を慎重に除去し、組織スライスに1〜2ミリリットルのFOXP3を加えます。次に、スライスを湿気のあるチャンバーに入れて一晩インキュベートします。PBSでスライスを洗った後、ろ紙でスライスを軽くたたいて乾かします。

次に、1〜2ミリリットルの二次抗体溶液をスライスに加えます。次に、スライスを100マイクロリットルのチラミドシグナル増幅作業溶液中で、室温で暗所で10分間インキュベートします。インキュベーション後、スライスをPBSで3回、それぞれ5分間洗浄します。

次に、インキュベーション前に1〜2ミリリットルのDAPI染色溶液をスライスに塗布します。10分間PBS洗浄する前に、スライスをクエンチャーで5分間インキュベートして、自家蛍光を消光します。次に、蛍光消光剤で密封します。

20倍および40倍の倍率で染色切片の顕微鏡画像をキャプチャします。対照ラットのヘマトキシリンとエオシン染色では、上皮細胞と繊毛が良好に配列されていることが示されました。鼻中隔粘膜は損傷を受け、好中球浸潤が著しい疾患群で剥離した。

多免疫蛍光染色により、疾患群ではRORガンマTおよびTCAM1の発現が増加していることが明らかになりました。しかし、FOXP3は発現不足であった。