まず、健康な人から尿サンプルを収集します。15ミリリットルのコニカルチューブで12ミリリットルのサンプルを遠心分離し、大きなアポトーシス体の細胞破片を除去します。次に、10ミリリットルの上清を新しい15ミリリットルのチューブに移します。
1ミリリットルのローディングバッファーと200マイクロリットルのEVトラップビーズスラリーをサンプルに加えます。サンプルを室温で30分間インキュベートし、端から端まで回転させます。サンプルをペレット化するには、15ミリリットルのコニカルチューブを磁気セパレーターラックに置きます。
上清を慎重に除去し、ビーズを1ミリリットルの洗浄バッファーに再懸濁します。次に、懸濁液を1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに移し、静かにピペットで移して、細胞外小胞またはEV結合ビーズを再懸濁します。マイクロ遠心チューブを1.5ミリリットルチューブ用の磁気セパレーターラックに置きます。
P200ピペットを使用して、上清を慎重に吸引します。次に、ビーズを1ミリリットルの洗浄バッファーで洗浄し、続いて室温で1ミリリットルのPBSで2回洗浄します。ビーズを100マイクロリットルの新しく調製した100ミリモルのトリエタノールアミンと5分間インキュベートします。
1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブ磁気分離器ラックを使用して、EVを含む排出液を回収します。得られた溶液を混合した後、真空遠心分離機濃縮機を使用して摂氏4度で溶出液を乾燥させます。
