まず、裸の針の端が7ミリメートル露出するように、プラスチックスリーブの保護を切断して、23Gバタフライニードルを準備します。次に、ポリマーチューブ付きのバタフライニードルを1ミリリットルのシリンジに接続します。麻酔をかけたラットを脳定位固定装置に乗せ、フェイスマスクを通して麻酔を維持します。
次に、ネズミの後頭頸部の毛を取り除きます。ネズミの頭をイヤーバーで固定します。脳定位固定装置フレームのノーズバーを動かして、動物の頭を垂直に約45度下げます。
後頭部に、後頭部の隆起とアトラス脊椎の間のひし形の面を持つ、わずかにくぼんだ表面を見つけます。70%エタノールで表面をこすります。CSF収集の場合は、菱形のくぼんだ面の中央にバタフライニードルを垂直に挿入し、針のプラスチックスリーブ保護によって動きがブロックされるまで、槽マグナに挿入します。
シリンジピストンを静かに引いて、CSFがゆっくりと針を流れるようにします。約100マイクロリットルのCSFをポリマーチューブに集めます。ポリマーチューブをバタフライニードルのすぐ近くでつまみ、この時点でチューブを切断します。
透明なサンプルをシリンジに引き込みます。サンプルを滅菌済みの0.2ミリリットルマイクロチューブに排出し、氷上で最大1時間保存します。動物の頭のCSF離脱部位を消毒します。
ラットを脳定位固定装置から外し、ケージに戻します。品質管理のために2マイクロリットルのサンプルを取っておき、残りはさらなる分析のために摂氏80度で保管します。ラットの3つの実験群で5日間にわたってCSF離脱を繰り返し、明確なCSFをもたらした成功した離脱の割合として表した。
CSF離脱のためにカニューレをカニューレ化した双頭インプラント寄贈ラットでは、成功率は71.1%であり、動物の頭部のカニューレがCSFサンプリングの繰り返しを妨げる可能性があることを示しています。これに対し、テザー電極またはテレメトリー電極のみで槽マグナ穿刺によりCSF採取を行った場合、成功率は86.7%、88.9%であり、これらの結果は、電極埋め込み動物における複数回のCSF回収には、穿刺技術がより適していることを示唆している。
