Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

まず、精製した未希釈のマウスCNS細胞懸濁液を2つの画分に分割し、ミクログリアとオリゴデンドロサイトをさらに単離します。次に、さまざまなCNS細胞タイプの表面抗原に特異的に磁気標識されたマイクロビーズをそれぞれの細胞懸濁液に添加します。カラムを磁場中に置き、カラムを同一視し、得られた細胞懸濁液をカラムに添加します。

磁気的にラベル付けされた細胞はカラム内に保持され、ラベル付けされていない細胞は通過します。カラムを磁場から除去した後、磁気標識された細胞をカラムからチューブに洗い流し、正に選択された細胞画分として入れます。オリゴデンドロサイトからのネガティブなフロースルーを2つのフラクションに分割して、ニューロンとアストロサイトをさらに分離します。

細胞タイプ特異的マーカーと生細胞または死細胞の識別を組み合わせたフローサイトメトリー解析により、ミクログリア、オリゴデンドロサイト、アストロサイト、およびニューロンが得られました。異なる細胞集団の表現型特性評価により、すべての主要なCNS常在細胞タイプについて、約90%の純度および生存率を有する単一細胞懸濁液が得られたことが証明されました。