まず、口腔内がカンジダの増殖に陰性であるマウスを、光の有無にかかわらず異なる濃度のクルクミノイドに対応する9つのグループにランダムに分配します。初日に、免疫抑制薬プレドニゾロンをグループのすべてのメンバーに皮下注射します。実験の初日から終了まで、飲料水に0.83ミリグラム/ミリグラムの濃度で塩酸テトラサイクリンを提供します。
2日目に、クロルプロマジンクロリドを各大腿部の筋肉に筋肉内投与して、マウスを鎮静させて口腔内接種を行います。次に、滅菌綿棒を新しく調製した標準化されたカンジダアルビカンスの懸濁液に浸します。マウスを仰臥位に置いた後、浸した綿棒で舌を30秒間こすります。
5日目に、免疫抑制を維持するためにプレドニゾロンの無料の皮下注射を投与します。7日目、治療前に、麻酔をかけたマウスを、スレッドを備えたPADデバイス上で仰臥位に置きます。切歯に糸を巻き付けて、口を開いたままにします。
70マイクロリットルの光増感剤を、C+L+グループに属する各マウスの舌の背部に分注します。その後、舌を口腔内に戻し、照射前期間として20分間暗所に置いておきます。光増感期間後、舌の背部にLED装置を置き、7分間点灯させます。
示されているように、C+L群に光増感剤を塗布し、マウスを暗所で27分間保持します。治療後すぐに舌の背部を1分間綿棒で拭き取り、滅菌綿棒を使用して舌からカンジダアルビカンスを採取します。各サンプルスワブを1ミリリットルの滅菌生理食塩水が入ったチューブに入れ、1分間ボルテックスして微生物細胞を再懸濁します。
遅滞なく、PBSで10倍段階希釈を行い、25マイクロリットルのアリコートをSabouraud Dextrose Agarプレートに二重にプレートします。プレートを摂氏37度で好気的に48時間インキュベートします。48時間後、デジタルコロニーカウンターを使用して酵母コロニー数を決定します。
各動物のカンジダ・アルビカンスの負荷を計算します。8日目に、動物を適切に安楽死させた後、外科的に舌を取り除き、舌全体が確実に取り除かれるように、環状乳頭の前に舌の除去を行います。最後に、孤立した舌の組織病理学的分析に進みます。
口腔カンジダ症のマウスモデルは、感染したマウスの舌に典型的な白い斑点と偽膜を示しました。抗菌光線力学療法は、80マイクロモルのクルクミノイド濃度でカンジダアルビカンスの生存率を低下させました。.感染していない動物の舌は、無傷の固有層、基底膜、糸状乳頭など、正常な健康な組織を示しました。
C-L群では、角質化上皮層に酵母とフィラメントが観察された。軽度の炎症反応が下にある結合組織に存在した。対照的に、80マイクロモルのクルクミノイドを媒介とする抗菌光線力学療法で治療されたマウスは、舌上皮の角質化層の真菌細胞が少なかった。
