Collection and Washing of Sperm from the AcroSensE Mouse Model for Real-Time Imaging

まず、AcroSensEを発現するトランスジェニックモデルマウスから単離された精巣上体から精子を採取します。0.5ミリリットルのMW培地を含む3.5センチメートルの組織培養皿で、摂氏37度で15分間泳ぐ手順により、精子の採取を行います。次に、細かい鉗子を使用して、スイムアウトコレクションディッシュから精巣上体組織を慎重に取り除きます。

精子を含む培地を15ミリリットルの円錐管に移し、スイングバケットローターを使用して懸濁液を室温で100Gで1分間遠心分離します。プラスチックピペットの助けを借りて、精子を含むMW上清を回収し、肉眼組織破片のペレットを捨て、丸底チューブに移します。摂氏37度に予熱したMW培地500マイクロリットルを加えて、上清量を1ミリリットルに調整します。

この混合物を丸底チューブ内で室温で8分間、400 Gで遠心分離します。次に、ゆるくペレット化された精子を残しながら、上澄みを慎重に取り除きます。大口径の移送パイプを使用して、指をはじくように手動でチューブを軽くたたいて精子を再懸濁させます。

精子が均等に再懸濁されたら、それらを新しい丸底チューブに移します。