最適化された凍結保存によるヒト胚性幹細胞由来網膜色素上皮細胞の保存

すべての翻訳はAIによって生成されていることに注意してください。英語版はこちらをクリックしてください

40 Views

•

02:51 min

•

November 3rd, 2023

DOI :

10.3791/200824-v

November 3rd, 2023

•

Xinyue Bai*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Ting Zhang*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaoyan Ding⁸, Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

* これらの著者は同等に貢献しました

文字起こし

まず、hESC由来の網膜色素上皮細胞を解離し、細胞懸濁液を調製してから、細胞をカウントします。次に、細胞を250gで室温で3分間遠心分離します。上清を注ぎ出し、細胞ペレットを凍結保存培地に再懸濁します。

次に、1ミリリットルの細胞懸濁液を1.2ミリリットルの極低温バイアルに移します。極低温バイアルを冷凍容器に入れ、摂氏マイナス80度で一晩凍結します。バイアルを液体窒素に移して長期保存します。

凍結バイアルを解凍するには、まず37°Cに加熱した金属ビーズで培地を加熱し、温めた培地の10ミリリットルを15ミリリットルのチューブに予め充填します。次に、液体窒素から極低温バイアルを取り出し、自動解凍システムに入れて迅速に解凍します。予熱した培地を0.5〜1ミリリットルを極低温バイアルに滴下して、細胞が徐々に適応するようにします。

次いで、細胞懸濁液の1.5〜2ミリリットルを培地と共に15ミリリットルのチューブにピペットで移す。細胞を250gで室温で3分間遠心分離します。次に、上清を捨てます。

ペレットを2ミリリットルの温かい媒体に再懸濁します。細胞を血球計算盤にロードし、それらをカウントして、回復率と生存率を決定します。融解した細胞を基底膜コーティングプレート上に置き、Y27632の培養液で培養します。

指数関数的段階の5日目に凍結した網膜色素上皮細胞は、融解後により高い付着率を示しました。それらの特徴的な六角形の形態と比較して、他の時点で凍結された細胞は線維芽細胞性の表現型を持っていました。P2 5日目の細胞は、融解後28日でより高い発現とより適切に局在する細胞マーカーを示しました。

異なる凍結保存培地が、解凍後に高い細胞生存率と接着を達成するのに等しく優れた機能を発揮したことが注目されました。

さらに動画を探す

Human Embryonic Stem Cells

Retinal Pigment Epithelial Cells