Quantitative Measurement of Epithelial Barrier Integrity and Confluency of 2D Bovine Ileal Enteroid-Derived Monolayer

まず、2Dウシ回腸内膜単層を含むトランズウェル培養プレートをインキュベーターから取り出します。プレートをバイオセーフティキャビネット内で室温で数分間平衡化させます。製造元の指示に従って、STX2電極が前処理され、ボルトオームメーターが1000オームに校正されていることを確認します。

プローブの長い方の端を基底外側コンパートメントに挿入し、短い方の端をトランズウェル上皮細胞培養の頂端コンパートメントに挿入します。セットアップが安定したら、細胞のないインサートを含め、トランズウェルインサートごとに3回の経上皮電気抵抗測定を行います。それぞれのチップの測定値の平均を計算します。

実験からブランクウェルの平均測定値を差し引き、ウェルにインサートの表面積を掛けて、上皮バリアの抵抗を決定します。コンフルエントな2D単層は、培養後1週間未満で観察されました。TEER測定では、12日目に低下する前に、7日間にわたって値が着実に増加していることが示されました。

染色された2D単分子膜の共焦点顕微鏡検査は、DAPI核染色、E-カドヘリン、およびF-アクチン染色の局在を示しています。細胞は、腸内分泌細胞、パネート細胞、および腸細胞細胞系統で分化しているようです。単層の頂端刺激により、サイトカイン産生が増加しました。