マウスの鼠径リンパ節におけるB16F10-GP細胞の節内注射

まず、100-Uインスリンシリンジを使用して20マイクロリットルのB16F10-GP黒色腫細胞懸濁液を吸引します。シリンジから気泡を取り除きます。次に、腫瘍切除手術を受けたマウスにおいて、細胞懸濁液を1つの鼠径リンパ節に注入する。

リンパ節の遠位端から針を挿入し、ゆっくりとリンパ節の中心に移動します。リンパ節の著しい腫れを観察し、液体が正確に注入されていることを示します。反対側の鼠径リンパ節に等量のPBSを注入します。

3-0縫合糸を使用して切開部を縫合します。傷口の周囲の皮膚をポビドンヨードで消毒し、マウスを清潔なケージに入れ、赤外線を使用して暖かさを維持します。マウスを外側褥瘡の位置に保ち、意識が回復するまで継続的に監視します。

B16F10-GP細胞を移植した後、ヘマトキシリンとエオシン染色によりリンパ節転移が観察された。初期段階では、転移性リンパ節は腫瘍細胞による部分的な占有を示し、一部の領域には罹患していないリンパ球がまだ含まれていました。後期までに、転移性リンパ節は腫瘍血管新生を伴う腫瘍細胞で満たされた。

さらに、末梢血中の抗原特異的CD8陽性T細胞の頻度は、初期段階では2.81%であったが、後期段階では1.48%に低下した。興味深いことに、CD8陽性T細胞の割合は、非転移性リンパ節では安定していたが、転移性リンパ節では初期段階で一過性に増強されたが、後期には急激に減少した。