まず、100ミリリットルの蒸留水を4グラムの砂糖と0.8グラムの寒天を含むビーカーに注ぎます。連続的に攪拌しながら混合物を摂氏100度に加熱します。混合物を火から下ろして冷まします。
温度を80°Cに保つために火を弱めます。次に、7.4グラムの小麦粉を加え、続いて2.8グラムの酵母を混合物に加えながらかき混ぜます。次に、モルデックスのプロピオン酸溶液を混合物に加え、温度を摂氏50度まで冷却します。
psidium guajava植物抽出液を加え、続いて0.5グラムのブロモフェノールブルーパウダーを加えます。準備された食品の混合物をペトリ皿に各皿がいっぱいになるまで注ぎます。食器が室温まで冷めたら、蓋をして4°Cの冷蔵庫で保管してください。
テスト用のバイアルを準備するには、まず、ハエを処理するための二酸化炭素タンク、針付き二酸化炭素吹き矢、フライパッド、絵筆、顕微鏡を準備します。ハエの年齢を標準化するために、少なくとも10個のショウジョウバエの蛹を含むバイアルを選択してください。成虫のハエを取り除くには、バイアルを裏返し、綿プラグとバイアルの側壁の間に針を挿入します。.
成虫のハエが綿栓で意識を失うまで、炭酸ガスブローガンを使用して麻酔をかけます。70%エタノールが入ったガラス瓶の上のバイアルを開き、ハエをその中に落とします。綿プラグでバイアルを密封します。
その後、摂氏25度、湿度60%、明光12時間、暗暗12時間の光サイクルでインキュベートします。次に、交尾を防ぐために、孵化から8時間以内に顕微鏡の助けを借りて、ハエを処女の雌と雄に分類します。女性の生殖器は淡い色で識別できますが、男性の生殖器は赤みがかった色合いをしています。
男性は、前足のセックスコームでも認識できます。選別したハエを雌雄1本ずつの2本の新鮮なチューブに分け、摂氏25度で6〜8日間孵化させます。ラベルの付いたペトリ皿を積み重ねることから始めます。
染色した食品を入れたペトリ皿をあぶらとり紙にひっくり返して、余分な液体を吸収します。次に、へらを使って、各皿の食べ物を12の等しいセグメントに分けます。食べ物のスライスを空のペトリ皿に移します。
次に、ハエが綿栓で眠るまで二酸化炭素を使用して麻酔をかけます。6匹の健康なハエを各ペトリ皿に慎重に移します。密封された皿をインキュベーターに入れます。
実験中にハエが逃げるのを防ぐために、各ペトリ皿の上部と下部のカバーをテープで固定します。24時間の飼育期間の後、二酸化炭素を使用してハエに再度麻酔をかけます。次に、ハエを70%エタノールで満たされた容器に移して廃棄します。
また、皿に残った食べ物は捨ててください。ペトリ皿の定量化を容易にするために、Epson Scan 2ソフトウェアを起動し、ファイル名を割り当てて、プレビュースキャンを実行します。各ペトリ皿の上部カバーと下部カバーの両方を個別にスキャンします。
オープンソースの画像エディタを使用してスキャンを画像に慎重にトリミングして、アーティファクトや食品の残留物を除去し、トリミングした画像をTIFFファイルとして保存します。次に、T.U.R.D.ソフトウェアを起動します。[ファイル] をクリックして新しい実験ドキュメントを作成し、名前を割り当てて Analysis サブフォルダーに保存します。
[プレート]オプションをクリックし、[プレートの追加]を選択して、分析するペトリ皿を選択します。新しいウィンドウが開き、選択したプレートの名前と新しいパラメータ設定が表示されます。「ブロック・サイズ」を「21」に、「オフセット」を「5」に、「最小サイズ」を「20」に、「最大サイズ」を「600」に設定します。
糞便堆積物検出の精度を確認するには、プレートに移動し、選択したプレートの検査、グラフィックス、注釈付き画像の表示の順にクリックします。画像を拡大して、入金数を確認します。必要に応じて、解析に含めない堆積物の選択を解除します。
T.U.R.D.ソフトウェアで分析した後、ハエの数をクリックしてハエの数を調整します。[プレート]、[グループの編集]の順にクリックしてグループ名を変更し、[グループ]列で適切なグループ名を選択します。
次に、「分析」をクリックし、「記述統計量」をクリックして「グループ」を選択し、各反復のデータを個別にエクスポートします。結果のスプレッドシート ファイルをすべて同じ指定フォルダに保存します。すべてのデータを 1 つのスプレッドシートにまとめるには、Excel Merge v4 アプリケーションを開きます。
CSVファイルを含むフォルダのパスを選択するというプロンプトが表示されたら、フォルダのアドレスを入力してEnterキーを2回押し、同じフォルダに新しいスプレッドシートを作成します。マージされたデータを含むスプレッドシートに新しいシートを追加して、すべての反復における各パラメータの平均を計算します。VLOOKUP関数を使用して、すべての反復の各パラメータの平均を収集します。
GraphPad Prismソフトウェアを起動し、データセット名を入力します。Excel スプレッドシートから Prism データ チャートにデータを転送します。[分析] をクリックして分析するデータセットを選択し、[OK] を押します。適切な検定パラメータを選択し、p値を分析します。
糞便沈着物の数、沈着物の総面積、およびIODは、処女の雄と雌の両方でP.guajava抽出物と比較して、通常の食品群で有意に高かった。固形食品の摂取量を追跡したところ、薬物供給群と非薬物供給群の間で食物消費量に有意差は認められなかった。しかし、ロペラミドを摂取したオスのハエは、通常よりも少ない餌を摂取しているようでした。
