血糖値とインスリン放出をモニタリングするためのマウスにおける高血糖および低血糖クランプのセットアップと操作

まず、血糖降下または高血糖クランプ用のポンプシステムを設定します。これを行うには、2本のハミルトンシリンジにインスリン注入液と30%グルコース溶液を入れます。充填されたシリンジを、グルコースとインスリンの注入を目的とした延長チューブセットアップの2本の長いチューブに接続します。

シリンジアセンブリをそれぞれのシリンジポンプに取り付けた後、各溶液をそれぞれの延長チューブに充填します。次に、1ミリリットルの注射器と動脈から血液を採取するための延長チューブに生理食塩水を入れます。次に、輸液用の延長チューブを、適切に麻酔されたマウスの事前に取り付けられた頸静脈カテーテルに接続します。

動物の頸動脈カテーテルに血液を吸血するための延長チューブ。セロハンテープを使用してチューブを固定します。チューブを入れたマウスを、寝具付きの空の500ミリリットルビーカーに入れます。

新しいシリンジに接続しながら、採血用の延長チューブの上端をクランプします。50マイクロリットルの血液を抽出し、1.5ミリリットルのチューブに移し、血糖値を測定します。次に、50マイクロリットルの生理食塩水を注入します。

ホルモン測定のために血液を採取するには、さらに50マイクロリットルの血液を抽出し、氷上で1.5ミリリットルのチューブに移します。ゼロ分間の血糖値測定後、インスリンシリンジポンプを始動して、適切な量のインスリンを注入します。血糖値を測定し続け、定常状態に達するまで、5分のモニタリング時間中に10〜120分ごとにグルコース注入速度を変更します。

高血糖クランプの場合は、インスリン注入と調整された定常状態の血糖値を除いた、低血糖クランプで示された手順に従います。