Microdissection Protocol for Isolating the Murine Left Atrium (LA) with the Pulmonary Veins

まず、マウスから分離した脱水した心臓と肺を、40〜50ミリリットルのPBSを含む解剖皿に入れます。倍率10倍の明視野顕微鏡の下に置き、照明を設定します。次に、心臓の背側表面を解剖皿に置きます。

外科用ハサミを使用して、心室壁と心房壁の間の移行を特定した後、心室を心房から慎重に分離します。分離した心房を、心臓の基部を上に向けて解剖皿に置きます。肺葉を後方に配置し、左心房とその付属肢を右側に、右心房とその付属肢を左側に配置して心房を向けます。

残りの左心室組織を解剖皿に固定して、準備を固定します。過度の力を加えずに肺葉を静かに広げ、解剖皿に固定します。次に、心臓底の中央に大動脈弓がある大動脈を見つけます。

心臓底の結合組織と脂肪組織を取り除き、特定されたすべてのランドマークを維持します。また、大動脈弓を切除して、心臓底の視界をクリアにします。大動脈のすぐ右側にある肺幹を検出し、その経路を後方に向かってたどって肺動脈を特定します。

その位置を確認するには、左葉と右上葉または中葉への経路を追跡して、肺門を特定します。大動脈の後ろの左右の主気管支の位置を決定します。肺門に向かって経路をたどって、その位置を確認します。

次に、大動脈の左側にある上大静脈を特定し、右心耳近くの右心房への経路をたどります。細かい鉗子による鈍解剖を使用して、肺動脈を心房の上面から慎重に切り離し、肺門で切断して脇に移動し、左心房自由壁と肺静脈を丸見えにします。肺門から主気管支を取り除き、気管支組織を捨てます。

肺門を調べて、肺動脈の口と主気管支を特定します。心房と心室を分離するには、残りの右心室の前部から切り込みを入れ、三尖弁を通って上大静脈の前側まで上に移動し、正面側から右心房を開きます。次に、心房間中隔に隣接する右後部心房自由壁を切断して、左右心房の間に分割を作成します。

心室中隔の隣の後部右心室壁を切断して、左心室と右心室を完全に切断します。肺の基底組織の一部を切除して肺葉のサイズをトリミングし、肺組織を3〜4ミリメートル残します。