Mouse Ocular Lens Equatorial Region Whole Mount Preparation and Confocal Imaging to Understand the Lens Structural-Developmental Relationship

固定レンズのマウント全体の準備は、固定化アガロースウェッジの作成から始めます。これを行うには、ガラス底の皿を取り、PBSで約5〜6ミリリットルの溶融2%アガロースを注ぎます。アガロースが固まるまで待ちます。

次に、鋭利な刃を使用して、凝固したアガロースに三角形のくぼみを作成します。アガロースウェッジを取り除き、1ミリリットルのPBSを皿に加えます。切断後に残った残留アガロースを吸引します。

必要に応じて、1つのディッシュに複数のウェッジを作成して、複数のレンズを装着します。金型を保管するには、摂氏4度に保つ前に、1ミリリットルのPBSを追加します。湾曲したピンセットを使用して、1ミリリットルのPBSを含むアガロースウェッジにレンズを配置します。

共焦点対物レンズの上に置いたときに、赤道領域が顕微鏡のガラスに下向きになるようにレンズを調整します。ディッシュを顕微鏡ステージに置きます。赤道領域に焦点が合っていることを確認するには、原子核を視覚化し、原子核が一列に並んでいることを確認します。

また、不規則に充填された形状の赤道上皮細胞や、細胞膜でF-アクチン染色で示される、正確に配列した六角形の子午線列細胞も確認してください。視野内の核のランダムなパッキングは、対物レンズの前方にあるレンズを示します。核が観察できない場合は、水晶体の後側が対物レンズに面している可能性があります。

このような場合は、湾曲したピンセットを使用して、レンズの赤道で正確に位置合わせされた核が観察されるまでレンズを回転させます。