患者の上部内視鏡検査中に収集された胃生検から単一細胞の分離を開始するには、まず、組織を15ミリリットルの円錐管の底に落ち着かせます。落ち着いたら、ピペットを使用して培地を吸引し、生検を1ミリリットルの抗生物質添加PBSで2回洗浄します。最低20ミリグラムの組織を、DTTを添加した1ミリリットルのPBSを含む1.5ミリリットルのチューブに移します。
細かい解剖ハサミを使用して、組織を1〜2ミリメートル以下の断片に切断します。卓上ミニ遠心分離機を15秒間使用して、チューブの底部で組織片を凝集させ、できるだけ多くの上清を吸引します。50ミリリットルのコニカルチューブに5ミリリットルの新鮮な消化バッファーを加えます。
このチューブから500マイクロリットルの緩衝液を、組織片を含む1.5ミリリットルのチューブに移します。次に、はさみを使用して、下から1、000マイクロリットルのピペットチップにカットし、ティッシュの損失を最小限に抑えるためにチップの直径を大きくします。次に、ピペットチップを改良して、小さな組織片を1.5ミリリットルのチューブから50ミリリットルのチューブ内の消化バッファーに移します。
消化バッファーと組織ミックスを37度で30分間インキュベートし、200 RPMで眼窩振とうします。次に、0.25%EDTAを含む5ミリリットルの温めたトリプシンを消化バッファー中の組織に加え、インキュベートします。同量の高度なDMEM/F-12培地を添加して消化バッファーとトリプシンを中和し、懸濁液を70ミクロンのセルストレーナーに通します。
