Embedding Gastric Biopsy-Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation

まず、融解した基底膜マトリックスを氷から取り除きます。計算された基底膜マトリックスを胃生検由来の単一細胞に加え、ピペッティングで約10秒間上下させて静かに混合します。次に、ピペットを使用して、マトリックスの50マイクロリットルアリコート、および細胞混合物を24ウェル組織培養プレート内の個々のウェルの中心に迅速に移します。

すぐにプレートを覆い、1回の滑らかな動きでプレートを逆さまにします。反転プレートを摂氏37度の組織培養インキュベーターに35分間入れて、基底膜マトリックスを重合させます。次に、500マイクロリットルの予温胃オルガノイド培地を各ウェルに加え、各ドームの上部が培地に完全に浸されていることを確認します。

オルガノイドは通常、単一細胞の播種後10日以内に同定可能です。20日目までに、それらは大きくなり、通常は継代する必要があります。ボディオルガノイドとアントラルオルガノイドの数は、播種後10日目にピークに達し、その後減少しますが、有意ではありません。

マントル生検組織から作製されたオルガノイドは、体生検組織から作製されたオルガノイドと比較して、より高い増殖速度を示しました。異なる患者において、オルガノイド形態の多様性は、典型的には単一のドームで観察された。しかし、平均して、オルガノイドの痙縮はほとんど変化を示さなかった。