抗体パネルを解析し、サイトメーターに赤、黄、青、紫の4つ以上のレーザーがあることを確認します。コンペンセーションビーズまたはシングルステインセルコントロールのいずれかでコンペンセーションマトリックスを確立します。キャリブレーションと標準化を行うには、各実験の開始時に、ビーズのピークが前の実験の目標値と一致するまで光電子増倍管の電圧を調整して、レインボー蛍光ビーズを実行します。
実験用の光電子増倍管の電圧とゲインを設定します。次に、抗体捕捉された補正ビーズを使用して、補正マトリックスを確立します。次に、対数上の側方散乱領域と線形上の前方散乱高さをドットプロットでプロットし、破片をゲートアウトし、S1ゲートを使用してセルサイズを選択し、ドットプロットでシングレットセルを選択し、S2ゲートで前方散乱幅と前方散乱高さを選択します。
フロア 4 ゲートを確立するには、各フロア 4 チャネルに関連する FMO を使用します。単一パラメータのヒストグラムで、各チャンネルの正信号を決定し、それに応じてゲートを確立します。確立されたゲーティング戦略を使用してサンプルを慎重に記録します。
P2 RY 12 plusシグナルを用いてミクログリアを同定し、ミクログリアのみのそれぞれのチャネルにおけるタンパク質発現を判定します。サイトメーター解析ソフトウェアのユーザーインターフェース上で、記録時に使用したのと同じゲーティング戦略を複製して、解析ゲートを確立します。統計量の追加関数を使用して、補正されたチャネルの高さで対象母集団の中央値を選択します。
テーブルエディタを使用して、各チャンネルのMFI値をスプレッドシートにエクスポートし、さらに統計分析を行います。リポ多糖処理は、ヒストン3リジン27アセチル化の増加を誘発した。MFIが性差内で正規化されると、染色された細胞のヒストグラム分析により、細胞が蛍光の増加にシフトする正規分布の集団が示されました。
ヒストン3リジン27アセチル化の同様の増加が染色細胞で見られました。
