新生仔マウスへの髄腔内注射の送達

まず、子犬を扱いながら、ダムから離れた別のケージに移動します。注射手順を開始する前に、解剖顕微鏡を使用して、椎間腔、または少なくとも子犬の脊柱管の正中線を確認します。25マイクロリットルまたは10マイクロリットルのシリンジに、製剤、ウイルス製剤、またはコントロール人工脊髄液などの10マイクロリットルの目的の注射物質を装填します。

動物が完全に麻酔されたら、体の動きの減少または不在によって確認されるように、子犬を顕微鏡の下にそっと配置します。左手の人差し指と親指で、両側の骨盤帯の間にある正中線に沿って椎間腔を慎重に触診します。尾の付け根を少しゆっくりと回転させて、背骨の正中線を特定しやすくします。

針を慎重に挿入し、くぼみが交差する点で70〜80度の角度に傾け、中央矢状面と位置が合っていることを確認します。針が骨に接触したら、徐々に角度を約30度に下げ、針を椎間腔に約2ミリ前進させます。50〜60秒以内に最大10マイクロリットルの容量をゆっくりと注入します。

注射完了後、10〜20秒間針を所定の位置に保ちます。漏れを防ぐために、針を穏やかに回転させて引き出します。注射後、子犬を加熱パッドの上に10〜15分間置き、子犬が完全に回復して再温まるようにします。

野生型新生児にファストグリーンの髄腔内注射を送達すると、投与された溶液がすぐに広く分布しました。.YFPレポーターマウスは、CRISPR-Cas9ベースの遺伝子編集の髄腔内注射の10日後に、脳全体に広範なYFP発現を示しました。