まず、麻酔をかけたマウスを外科的処置のために準備します。手術用ハサミを使用して、頭の剃った部分の中心に沿って皮膚を切開し、頭蓋骨を露出させます。次に、希釈過酸化水素を使用した滅菌綿棒で頭蓋骨を1〜3秒間洗浄し、新しい滅菌綿棒で頭蓋骨を乾かします。
頭蓋骨を前後に揃えるには、ブレグマとラムダで背側腹側の深さを測定します。bgmaを出発点として使用して、皮質上の目的の領域を見つけてマークします。次に、トレフィンドリルビットと歯科用ドリルを使用して皮質を露出させます。
ドリルビットの角度が頭蓋骨の湾曲に対して垂直であることを確認して、開頭手術を均一にし、損傷を防ぎます。抵抗の減少が感じられるまで穴を開けてから、穴あけプロセスを停止します。23ゲージの針先を使用して、剥離した骨片を慎重に取り除きます。
次に、冷たいACSFに浸したサージカルフォームで露出した皮質をきれいにして、破片を取り除き、出血を止めます。マイクロプリズムの挿入を容易にし、皮質の圧力を緩和するために切開を行います。サージカルナイフを脳定位固定装置アームのホルダーに取り付けてブレードを向けるか、脳定位装置アームを内側外側軸に沿って切断します。
次に、ナイフを目的の前方後座標に移動します。次に、ナイフを開頭術の内側端に移動し、骨に触れるまでゆっくりと下げます。与えられた方程式を使用して、頭蓋骨の表面からのプレカット切開の深さを決定します。
切開の長さが1ミリメートルを超えていることを確認してください。理想的には、約1.2ミリメートルである必要があります。ナイフを開頭術の内側端から切開の開始内側座標に移動し、ナイフを皮質にゆっくりと下げます。
硬膜に穴を開けて皮質に入った後、冷たいACSFを一滴垂らして、組織を潤滑し、水分を補給します。最終的な深さに達したら、ナイフを内側の外側軸に沿って動かします。ティッシュがナイフと一緒に引きずられる場合は、ナイフを数回上下に動かして、ティッシュが切断されていることを確認します。
次に、ナイフを最終的な深さに戻しながら、横方向に移動し続けます。完了したら、ナイフをゆっくりと上げます。血液が見られる場合は、ACSFに浸したサージカルフォームで切開部位を洗浄し、血液を希釈して除去します。
マイクロプリズムを挿入する準備ができるまで、露出した皮質の上に飽和した泡を置きます。マイクロプリズムをインプラントキットに取り付けます。プリズムの撮像面がベースプレートのネジと反対側にあることを確認します。
マイクロプリズムを脳定位固定装置フレームに取り付け、切開部に合わせるように向きを変えます。マイクロプリズムを切開部位にゆっくりと下げます。最初はACSFを取り除きますが、プリズムが皮質に入ったら、冷たいACSFで洗い流します。
必要に応じて、ACSFを追加し、プリズムを上下に動かして皮質を攪拌します。露出した皮質領域とレンズをシリコン接着剤の保護層で覆い、周囲の頭蓋骨とダミースコープへの過剰な接着剤を最小限に抑えます。次に、セメント塗布で適切なインプラント配置のためにヘッドプレートを後方に配置します。
ヘッドプレートの正中線を提案された開頭術のわずかに右側に合わせ、頭部固定実験中に両側を固定できるようにします。次に、不透明セメント粉末1スクープを4滴の混合媒体と混合し、触媒1滴を混合して、接着性歯科用セメントを調製します。ヘッドプレートと頭蓋骨にセメントを塗布し、セメントが硬化するまでヘッドプレートを所定の位置に保持します。
露出した頭蓋骨と組織を覆うように接着セメントを塗布し、安定するまでマイクロプリズムとヘッドプレートを組み込みます。鉗子でマイクロプリズムを安定させながら脳定位固定アームを上に動かし、ダミー顕微鏡を取り外します。保護カバーをレンズに置き、ネジを締めて固定します。
暗闇の中で野外を探索する動物のニューロンは、3週間の間隔をあけたセッションで同等のレベルの蛍光と発火率を示しました。
