ミトコンドリアのイメージングによるアイソフォーム特異的RAR調節への応答の挙動解明

まず、SHSY 5Yセルをガラス底のセル皿に15 x 10光線の密度でめっきし、1ミリリットルあたり4セルの電力を供給します。細胞を1%FBS含有培地中のオールトランスレチノイン酸で5日間処理し、続いて脳由来神経栄養因子で2日間処理します。次に、細胞を滅菌PBSで洗浄します。

10〜7モルのRAまたはアイソフォームアゴニストで、等量のMEMおよびF12培地を1%FBSと組み合わせて、細胞を72時間処理します。培地を、20ナノモルのTMRMと混合した新鮮な1%FBS含有培地と45分間交換します。摂氏37度に設定されたレーザー走査型共焦点顕微鏡に接続されたインキュベーターに細胞を置きます。

63倍油浸アポクロマート対物レンズを使用して画像を撮影します。画像サイズを 512 x 512 ピクセルに設定し、ピンホール開口部を 1 面積単位に設定します。各セルプレートの 5 つの異なる視野と、等距離にある 8 つの Z 平面の Z スタックから 15 フレームの時系列を収集します。

結果のLSMファイルには、時間、位置、およびZスタックデータが含まれている必要があります。