マルチプレックス生細胞イメージングを用いた患者由来オルガノイドの薬物反応を解析するためのGen5ソフトウェアでの画像解析(英語)

まず、Cytation 5 ライブセルイメージングシステムを使用して、蛍光標識した PDO をイメージングします。次に、Gen5ソフトウェアを起動します。[実験] に移動し、タスク マネージャーで [開く] をクリックします。

目的の実験を開き、 [プレート] を選択し、 [表示] をツールバーで選択します。次に、データのドロップダウン メニューを [Z 投影] に切り替えます。選択したウェルをダブルクリックします。

[分析] を選択します。[I want to set up a new image analysis data reduction step]をクリックし、[OK.In Analysis settings]をクリックし、[type]を[Cellular Analysis]に、[detection channel]を[Z Projection transformed TSF Brightfield]に設定します。[オプション] をクリックして、プライマリ マスクとカウント ページを開きます。

しきい値ボックスの [自動] をオンにし、[OK] をクリックしてポップアップ ウィンドウを閉じます。[オブジェクトの選択]で、最小および最大オブジェクト サイズを定義して、細胞の破片または単一セルを除外し、必要に応じて他のフィーチャを選択します。次に、[適用]をクリックすると、マスクされたオブジェクトが強調表示されます。

細胞解析ツールバーでサブポピュレーション分析を設定するには、[計算指標]をクリックします。次に、右下隅にある [関心のあるオブジェクトレベルの指標を選択または作成] をクリックします。使用可能なオブジェクト指標から、目的の指標([循環度(Circularity)] など)を選択し、[挿入(Insert)] をクリックします。

[OK] をクリックして確定します。次に、細胞解析ツールバーで「亜母集団解析」を選択し、「追加」をクリックして新しい亜母集団を作成します。部分母集団の名前を入力します。

オブジェクトメトリックで、「条件の追加」をクリックして、選択したメトリックを追加します。「条件の編集」ウィンドウで必要なパラメータを入力し、「OK」をクリックします。ウィンドウ下部の表で目的の結果を選択し、「OK」をクリックしてから「適用」をクリックします。「オブジェクトの詳細」で、マスキングを表示する指定されたサブ母集団を選択します。

問題がなければ、[細胞解析] ウィンドウで [OK] をクリックし、[ステップの追加] をクリックして解析をすべてのウェルに適用します。