まず、アブラナ属の種をマイクロチューブに入れDH12075。種子を脱脂するには、マイクロチューブに水と0.1%洗剤を加え、60秒間振とうします。次に、種子を水で洗い流し、続いて70%エタノールでそれぞれ60秒間すすぎます。
次に、種を10%次亜塩素酸ナトリウム溶液に入れ、20分間振とうします。漂白剤を取り除いた後、種子を滅菌水で60秒間それぞれ4回洗います。種子発芽培地を入れたペトリ皿に種子を置きます。
種子を摂氏4度で一晩冷やして重ねてから、栽培室に移します。5日後、苗木を植物成長培地の入った植物培養ボックスに移します。毛むくじゃらの根誘導プラスミドPRIA 4Bを担持したTi以下のアグロバクテリウム・ツメファシエンスC58C1を5ミリリットルのLB培地に接種する。
培養液を摂氏28度で一晩培養し、600ナノメートルの光学濃度が0.9対1になるまで成長させます。細菌接種をシリンジに移します。シリンジに取り付けられた26ゲージの針を使用して、生後18日の苗木の胚軸を培地から約1センチメートル上に穿刺します。
約50マイクロリットルの接種を創傷に注入し、胚軸の表面の組織を引っ掻きます。21°Cの栽培室に2〜4週間戻します。次に、胚軸から毛むくじゃらの根が浮かび上がったカルスを切り取ります。
毛むくじゃらの根を持つカルスを、アグロバクテリアの増殖を抑制するための毛根成長培地と抗生物質を入れたペトリ皿に置きます。皿を通気性テープで密封してから、摂氏24度でインキュベートします。インキュベーション後、毛根をカルスから単離し、個々の根を毛根成長培地に移します。
あるいは、野生型シュートとトランスジェニック毛根からなる複合植物を生成するには、植物の在来根を除去する。次に、毛むくじゃらの根が出現した植物を、植物成長培地と抗生物質が入った培養ボックスに移し、アグロバクテリアの増殖を抑制します。
