まず、表面滅菌したシロイヌナズナCol-0の種子を、種子発芽培地の入ったプレートに置きます。2日間の低温成層後、日長21°C、湿度50%に設定した培養室に移します。生後1週間の苗木を、植物成長培地を入れた植物培養ボックスに移します。
Agrobacterium tumefaciens培養物をLB培地中で、600ナノメートルの0.9対1の光学密度に達するまで増殖させます。インスリン注射器に取り付けた針を使用して、生後1か月のシロイヌナズナ植物の一次花序茎の基部に約50マイクロリットルの細菌培養液を注入します。シリンジで一次ステムの表面の組織を引っ掻きます。
2〜4週間後、出現した毛根を切除し、アグロバクテリアの増殖を抑制するために抗生物質を添加した毛根成長培地を使用してペトリ皿で栽培します。毛根を暗所で摂氏24度で培養します。1〜2週間後、毛根成長培地でプレート上の毛根を個別化し、4〜5週間ごとに選択した毛根線を新しい培地に移します。
毛むくじゃらの根を再生培地でプレートに移してカルスの形成を誘導し、21°Cで長日日周期で培養します。芽がカルスから出てきたら、芽を切り取り、2〜3週間伸長培地に移して、成長と伸長を促進します。次に、細長いシュートを根誘導培地に移します。
最後に、発根した植物を土壌に移し、トランスジェニック選択を行います。A.thalianaでは、試験したすべての毛根系統で14日以内に黄色カリが誘導されました。濃い緑色の斑点として見える最初のシュート原基は、再生培地に移してから3週間以内に出現しました。
4週間後、新芽は90%の線で毛根を覆い、いくつかの症例では不定根形成が見られました。しかし、1本の線は3ヶ月経っても再生しませんでした。野生型と比較して、A.thalianaの毛むくじゃらの根の再生剤は、密な根系、しわの寄った葉、および開いた時期の変化を伴う矮性表現型を示しました。
