Epon Post-embding相関光電子顕微鏡法のためのマウス脳切片の明視野および蛍光画像の画像解析

まず、mScarletを発現するマウス脳組織の明視野画像と蛍光画像をキャプチャします。生データを見つけて、ImageJ で異なる視野の複数の明視野画像のナビゲーション マップを作成します。次に、ImageJを開き、プラグイン間を移動し、[ステッチ]をクリックして、グリッドまたはコレクションのステッチを選択します。

「type grid snake by column」をクリックし、「order up」と「order」を「left」を選択して、「set slice size」をクリックします。データパスを選択して[ファイル名の設定]をクリックし、[表示フュージョン]をオンにします。特定のセルの連続した明視野画像をインポートするには、[ファイル]をクリックして[インポート]を選択し、次に[画像シーケンス]を選択します。

これらのイメージの合計強度投影については、画像に移動し、スタックを選択して Z 投影をクリックし、次にスライスの合計をクリックします。次に、[編集]を選択して[反転]をクリックすると、合計強度投影画像が反転し、金ナノ粒子の視認性が向上します。次に、シーケンシャル蛍光画像をインポートします。

合計強度投影イメージを作成するには、イメージをクリックしてスタックを選択します。次に、Z投影に移動し、[合計スライス]をクリックして、画像をTIF形式で保存します。明視野画像と蛍光画像の両方の合計強度投影画像を開きます。

画像に移動し、色を選択し、チャンネルのマージをクリックして、明視野画像の合計強度投影と蛍光画像の合計強度投影をマージします。その後、画像を選択してタイプをクリックし、続いてRGBカラーをクリックして、合成画像の形式をRGBに変換します。金ナノ粒子は緑色に見え、蛍光タンパク質は赤色に見えます。

次に、画像をTIFファイルとして保存します。