ショウジョウバエ幼虫からの脳の分離とS2シュナイダー細胞の採取

まず、ショウジョウバエの幼虫を35ミリメートルの空のシャーレに入れ、鉗子を使って水道水で2回洗い、残った餌を取り除きます。氷冷PBSを含む解剖皿に幼虫10匹を置きます。幼虫の背側を上にして、両端を皿に固定します。

後端の体壁に小さな切開をします。マイクロダイセクションハサミを使用して、背側正中線に沿って体壁を前端に向かって切断します。パスツールピペットを使用してPBSで幼虫の内部を3回洗い流し、脳を露出させます。

鉗子を使用して脳を見つけて持ち上げ、マイクロダイセクションハサミで脳を分離します。解剖した脳を氷冷PBSで満たされたマイクロ遠心チューブに移し、すべての脳を氷上で採取します。RNAマイクロプレップキットを用いてRNA抽出を行います。

S2シュナイダー細胞単離では、シュナイダー細胞培養液に5ミリリットルの氷冷PBSを添加します。細胞を15ミリリットルのチューブに移し、1000 Gで摂氏4度で5分間遠心分離して、細胞をペレット化します。ピペットを使用して、氷冷PBSで細胞を2回すすぎ、再度遠心分離します。

RNAミニプレップキットを用いてRNA抽出を行います。