トランスフェクション用マウス多能性幹細胞(mPSC)の調製

ゼラチンコーティングされた24ウェルプレートを調製するには、各ウェルに200マイクロリットルの0.2%ゼラチン溶液を加えます。プレートを静かに振って溶液を均一に広げ、ウェルを室温でコーティングします。15分後、真空吸引器を使用して、ウェルから残ったゼラチンを慎重に取り除きます。

0.5ミリリットルの新しく調製したNBIL培地を各ウェルに加えます。そして、プレートを組織培養インキュベーターに入れて予熱します。30ミリリットルの洗浄剤を50ミリリットルのコニカルチューブに分注します。

mESCの組織培養皿から培地を吸引し、必要な量の細胞剥離培地を添加します。3〜5分後、P1、000ピペットを使用して15〜20回ピペットで上下させます。顕微鏡で細胞を観察します。

単一細胞懸濁液を確実にするには、細胞懸濁液を洗浄培地の入った50ミリリットルのチューブに移します。懸濁液を室温で300Gで5分間遠心分離し、洗浄媒体を吸引します。ペレットを約300マイクロリットルの洗浄媒体に再懸濁します。