マウス多能性幹細胞(mPSC)の逆トランスフェクションとフォワードトランスフェクション

まず、200マイクロリットルのNBIL培地を1.5ミリリットルのチューブに分注します。26マイクロリットルの最適なトランスフェクション試薬混合物をDNAの最適な混合物に加えます。試薬を約10回激しくパイプします。

必要量のmPSC懸濁液を200マイクロリットルのNBILチューブに移します。次に、lipofectamine 2000とDNA混合物をチューブに加え、ピペッティングでよく混合します。5分後、混合物を300Gで5分間遠心分離し、上清を除去し、チューブ内に約50マイクロリットルを残します。

ペレットを100マイクロリットルのNBIL培地に再懸濁します。細胞懸濁液をゼラチンでコーティングした24ウェルプレートに移し、プレートをインキュベーターに入れます。ゼラチンでコーティングされた24ウェルプレートのウェルあたり25, 000細胞を播種するために、必要な量のmPSC懸濁液を移し、プレートをインキュベーターに入れます。

トランスフェクションの1時間前。ウェルからの培地を0.5ミリリットルのNBIL培地と交換します。インキュベーション後、滴下し、リポフェクタミン2000とDNA混合物をウェルに加えます。

プレートをインキュベーターに48時間置きます。