トランスフェクションしたマウス多能性幹細胞(mPSC)のフローサイトメトリー解析

mPSCのトランスフェクション後、6ウェルプレートから培地を吸引します。次に、各ウェルに200マイクロリットルのトリプシンを追加します。渦巻きさせ、摂氏37度で30秒間インキュベートします。

プレートの側面を軽くたたき、200マイクロリットルの氷冷FACSバッファーを加えます。P200ピペットを使用して、各ウェルの内容物を混合して細胞を取り除き、単一細胞溶液を作製します。各ウェルから 200 マイクロリットルを 96 ウェルプレート上の適切なウェルに移し、プレートを 300 G で 5 分間遠心分離します。

遠心分離後、フローサイトメーターでサンプルを泳動する前に、ペレットを150マイクロリットルのFACSバッファーに再懸濁します。逆トランスフェクションと比較して、フォワードトランスセクションはマーカー陽性の細胞の割合が有意に低いことを示しました。興味深いことに、フォワードトランスフェクトは、細胞集団に平均して有意に少ない量のDNAを送達しませんでした。

逆切断では、インキュベーション時間がレポーター陽性細胞の割合に有意に影響しました。しかし、陽性細胞における平均レポーター発現は、インキュベーション時間の影響を受けませんでした。ポリトランスフェクションとコトランスフェクションのいずれにおいても、フォワードトランスフェクションはリバーストランスフェクションと比較して、選択したエンドポイントに存在する細胞数を有意に減少させました。

リバースポリトランスセクションの場合、トランスフェクション効率が高く、よく表現されたDNA比のダイナミックレンジが広くなりました。