マウス眼からの網膜血管系の分離と顕微鏡スライドへの取り付け

まず、二重蒸留水で満たされた24ウェルディッシュで孤立した網膜を採取します。次に、二重蒸留水を800マイクロリットルのYLトリプシン溶液と交換し、摂氏37度で穏やかに4時間15分間振とうせずにインキュベートします。YLトリプシン溶液に浸したガラス移送ピペットを使用して、糸くずの出ない二重蒸留水を含む35mmのペトリ皿に網膜を移します。

外側の核層を取り除くには、網膜の半球を下向きに反転させ、まっすぐなシングルヘアブラシを使用して皿の底にそっと押し付けます。ループブラシを使用して、網膜の視細胞を優しく払い落とします。次に、硝子体を取り除くために、網膜の半球を上にひっくり返します。

湾曲した鉗子を使用して、解剖顕微鏡で硝子体をつかみます。別の湾曲した鉗子を使用して、視神経をつなぐ硝子体の端をつかみます。2つの鉗子を互いに引き離して、硝子体を取り除き、廃棄します。

次に、網膜を再び下向きに反転させ、まっすぐなブラシを使用して皿の底にそっと押し付けます。その後、ループブラシを使用して、視神経乳頭から末梢に向かって血管系をブラッシングし、残っている神経組織を取り除きます。まっすぐなブラシで網膜をゆっくりと回転させ、ループブラシを使用して、血管網がきれいになるまで神経組織の小さな塊をすべて取り除きます。

網膜血管系を取り付けるには、ループブラシを使用して網膜の半球体を上向きに反転させ、血管系をスライドガラスにそっと押し下げます。次に、髪の毛を使って、開いた血管系をスライドの中央に留めます。お椀型の網膜血管を視神経から末梢にブラッシングして、血管系を平らに取り付けます。

血管系がスライドに完全にくっつくまで、すべての方向にブラッシングを繰り返します。