がん組織切片のマルチプレックスサイクリック蛍光免疫組織化学的染色

まず、がん組織切片を含む事前に準備したスライドを入手します。一次抗体のワーキングミックスを調製します。抗体複合体をスライド切片に添加し、室温で1時間インキュベートします。

次に、スライドを0.1%Tween PBSで5分間3回洗浄します。蛍光二次抗体混合物を調製します。スライド上に滴下し、室温で1時間インキュベートします。

その後、2回目の一次抗体インキュベーションを室温で1時間行います。スライドを0.1%Tween PBSでそれぞれ5分間、3回洗浄します。そして、ろ紙を使用して、組織の周囲から余分な水分を取り除きます。

同様に、2回目の二次抗体のインキュベーションを行い、前述のように洗浄します。次に、過マンガン酸カリウム試薬を組織に加えます。1分後、流水で5分間すすぎます。

アルコール濃度を上げて脱水を行います。最後に、DAPIを追加して組織切片を完全に覆い、マルチスペクトルイメージング用のカバースリップを配置します。マルチプレックス免疫蛍光イメージングにより、肺がんの脳転移組織にCD3陽性、CD8陽性、CD20陽性細胞が存在することが示された。