患者由来の3D神経膠腫オルガノイドを作製するためのチョッパー処理腫瘍片の培養

1 まず、患者から腫瘍組織2を採取し、チョッパーで処理します。 3 刻んだ腫瘍4が入ったシャーレを45度まで上向きに傾け、H-GPSA培地の2.5ミリリットル5を慎重に取り除きます。6 腫瘍片を洗浄するために、RBC溶解緩衝液を2ミリリットル7加え、オービタルシェーカー8で低速でインキュベートします。

9 次に、溶解バッファーを完全に廃棄します。図10次に、患者由来の11オルガノイド培地4ミリリットルを組織片12に加え、組織塊を超低付着性13の6ウェルプレートに移す。14 プレートをオービタルシェーカー15で2〜4週間インキュベートする。

16 2日ごとに、使用済みの培地の半分を、あらかじめ温めた新鮮な患者由来のオルガノイド培地と交換する。18 組織の低酸素症を予防するために、19 患者由来のオルガノイド20を滅菌ガラスのペトリ皿21に移し、顕微鏡下で組織の形態を観察する。22次に、メスを使用して、接着組織を切断します。

23 チョッパー法を用いて得られた患者由来オルガノイド 24 は、手動で刻んだオルガノイドと比較して、1週間以内に所望の丸みを帯びた形状に到達した 25。26 そして、形成されたオルガノイドの数 27 は、この方法を使用して有意に多かった。