まず、安楽死溶液に1時間浸されたカエルを取り、足をつまんで痛み反応がないことを確認します。Xenopusの重量を量り、鼻から通気口までの長さなど、追加の測定を行います。カエルを仰向けに置き、手足を体に近づけて固定します。
解剖ハサミを使用して、正中線に沿って皮膚を切開し、次に横方向に伸ばして2つの皮膚フラップを作成します。次に、linea albaを見つけて、鉗子でつかみます。それを体腔からそっと引き抜き、はさみを使用して、下にある筋肉組織を切り抜きます。
キャビティ壁から 2 つのフラップを作成します。まだ鼓動している心臓を特定し、解剖ハサミを使用して烏口骨をトリミングし、アクセスを改善します。次に、組織鉗子を使用して細い心膜を特定し、それを伸ばします。
虹彩切除術のハサミの先端を使用して、心膜を慎重に穿孔します。次に、心膜を心臓の3つの部屋から取り出します。このプロトコルでは、心室、肝臓の左葉、膵臓、脂肪体、対になった腎臓のサンプリングが示されています。
心室をサンプリングするには、鉗子で心室を頂点でつかみ、耳介と動脈幹への接続を特定し、これらのポイントの下で切断します。次に、肝臓の3つの葉を観察します。左葉をそっと持ち上げて肝管と嚢胞管を露出させ、この葉の3分の1を管の下にサンプリングします。
カエルが雌の場合は、胚上皮で覆われた卵巣を見つけます。ローブを両側にゆっくりと再配置して、付着領域を明らかにします。はさみを使用して、卵巣を損傷することなく、腎臓にできるだけ近づけて切除します。
次に、肝臓の内側葉と、腸間膜と肝膵管を介した胃と十二指腸への接続を調べます。虹彩切除ハサミを使用して、腸間膜、肝十二指腸靭帯、および十二指腸近くの肝膵管を切断します。膵臓と管を肝臓の内側葉から切り離し、暗い肝臓組織を付着させたままにします。
次に、歯付き鉗子の助けを借りて胃を保持し、次に組織鉗子を使用して膵臓の上端を保持します。5倍の倍率で、膵臓を胃から慎重に分離します。次に、膀胱を見つけて切除し、総排泄腔にできるだけ近づいて切断し、組織を廃棄します。
その後、大腸を特定して伸ばし、総排泄腔の近くで切断します。次に、脂肪体を左右に分けて、左の脂肪体の根元をつかみ、腹膜から切り取ります。メスのカエルまたは卵管が見えるオスの場合は、卵管を保持し、腎臓と総排泄腔から分離します。
クロアカ接合部を切断し、腎臓から切り離し続け、透明な腹膜の付着物を取り除きます。次に、鉗子を使用して腎臓を保持し、腹膜の下端を切断します。ハサミを使用して体腔から腎臓を持ち上げます。
腹膜をできるだけ腎臓に近づけて、害を及ぼさないようにします。5倍の倍率で、余分な腹膜と精巣、脂肪体、脾臓などの残留組織をすべて取り除きます。動物を放した後、お腹の上に置き、手足を固定します。
サンプリング用の後肢を1つ選択し、その足を固定します。腓腹筋または脛骨腓骨の領域の上からアーモンド形の皮膚フラップを切除します。その後、すべてのサンプルをPBSですすぎ、余分な組織がないか確認し、必要に応じて使用前にトリミングします。
心室、肝臓の左葉、膵臓、左脂肪体、対になった腎臓、および皮膚のフラップは、安楽死から1時間以内にきれいに切除されました。
