成長増強のためのハイドロゲル中での脂肪由来幹細胞の3D細胞培養

まず、44ミリリットルの基礎培地を50ミリリットルの遠心チューブに移します。5ミリリットルの10%FBSを培地に加えます。次に、ペニシリン、ストレプトマイシン、アムホテリシンB抗生物質溶液をそれぞれ0.5ミリリットルピペットで移します。

高速デキストラン溶液を含むバイアルを1000Gで30秒間、摂氏20度で遠心分離します。バイアルに175マイクロリットルの水を加えて、1リットルあたり30ミリモルの最終濃度にします。材料が完全に溶解するまで、チューブを中速で30秒間ボルテックスします。

溶解した物質を氷上で5分間インキュベートします。チューブを遠心分離してから、内容物を再度ボルテックスします。次に、さらに使用するまでチューブを氷の上に置きます。

次に、架橋剤を遠心分離して材料を濃縮します。188マイクロリットルの水を架橋剤バイアルにピペットで移し、チオール基の最終濃度を1リットルあたり20ミリモルにします。すべての材料が溶解するまで架橋剤溶液をボルテックスします。

インキュベーション後にチューブを遠心分離します。その後、さらに使用するまで室温に置く前に、短時間ボルテックスします。次に、表に示されているように、10マイクロリットルのヒドロゲル用の脂肪由来幹細胞懸濁液を調製し、マスターミックスを作成します。

9マイクロリットルのマスターミックスを96ウェルストリッププレートのウェルに移します。3分後、1マイクロリットルの分解性架橋剤を混合物に加え、ゲルを固化させます。ピペット。170マイクロリットルの予熱した完全培養培地をハイドロゲルの上に。

インキュベーション後に培地を交換してください。