光生体調節曝露を用いたハイドロゲル包埋脂肪由来幹細胞の増殖増強

まず、緑色の波長のダイオードレーザーシステムをセットアップします。レーザーのスイッチを入れ、推奨される時間ウォームアップします。レーザーが定常状態に達して安定したら、レーザーパワーメーターを使用してレーザーの出力を測定します。

各波長のパワー値を記録します。培地一式を交換した後、ハイドロゲルに埋め込まれた脂肪由来幹細胞を含むウェルプレートをダイオードレーザーシステムの下に置き、選択した流暢さに対して計算したレーザー照射時間を選択した波長でハイドロゲルに照射します。各実験群に非照射対照があることを確認してください。

培養プレートを摂氏37度、二酸化炭素添加率5%、湿度85%でインキュベートします。次に、酵素細胞回収液をPBSで1:20の割合で希釈し、作業液を調製する。回収が必要な細胞を含む各ゲルまたはウェルに30マイクロリットルの作業溶液を加えます。

プレートを静かに揺らしたり、渦巻かせたりして、回収液が均等に分散するようにします。プレートを回収液と45分間インキュベートします。インキュベーション後、プレートをインキュベーターから慎重に取り出し、プレートを1, 409Gで20°Cで5分間遠心分離し、細胞をペレット化します。

次に、細胞ペレットを乱すことなく上清を慎重に廃棄します。220マイクロリットルの滅菌PBSをペレットにピペットで移動します。均一な単一細胞懸濁液を得るために、完全な混合を確実に行ってください。

脂肪由来幹細胞は、播種および光生体調節曝露の24時間後に丸みを帯びた形態を保持しました。細胞は、単一細胞として、またはブドウのようなクラスターとしてゲル全体に散在していました。形態は3D培養で10日後も変化しなかった。