カンジダ・グラブラタのフルコナゾール誘導プチコロニーにおけるミトコンドリア機能解析

まず、カンジダ・グラブラタ培養とYPD培地を作業台に置きます。YPD培地で600ナノメートルの酵母細胞懸濁液の光学濃度を0.1に調整します。細胞懸濁液の1ミリリットルを5ミリリットルのチューブに移します。

滅菌綿棒を酵母細胞懸濁液に浸します。Mueller Hinton Agarプレートで綿を前後に綿棒で拭き取り、60度で2回回転させます。次に、周囲を綿棒で拭いて均一にカバーします。

マーカーを使用してプレートを3つの等しいセクターに分割します。鉗子を炎で1〜2秒間滅菌します。冷却後、各セクターの中央に1つの空のディスクを置きます。

各ディスクに12.5マイクロリットルのフルコナゾールストックを追加します。.気泡を避けるためによく混ぜ、摂氏37度で20〜24時間インキュベートします。翌日、20マイクロリットルの20%トリフェニルテトラゾリウムクロリドを各コロニーの中心に直接加えます。

プレートを摂氏37度で30〜40分間インキュベートします。48 ビットのフルカラー光学スキャナーを使用して、1200 DPI でプレートをスキャンします。フルコナゾール治療は、C.glabrataの小柄な変異体を効果的に誘導します。

Tゼロ培養のフルコナゾール椎間板を囲む成長のない透明な円形ゾーンは、親真菌の薬剤耐性が低いことを示しています。T3培養では、椎間板の近くに多くの小柄なコロニーが形成され、3回の光線力学療法治療を繰り返した後に薬剤耐性が示唆されました。